內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細菌的細胞壁成分,通常在用于細胞培養(yǎng)的胎牛血清(FBS)中發(fā)現(xiàn)。FBS中內(nèi)毒素的存在會對細胞生長和活力產(chǎn)生負面影響,并可能導(dǎo)致不準確的實驗結(jié)果。
內(nèi)毒素可以激活免疫細胞,誘導(dǎo)促炎細胞因子的釋放,從而導(dǎo)致細胞死亡,抑制細胞增殖。它們還可以干擾細胞過程,如DNA合成和蛋白質(zhì)表達,從而影響實驗結(jié)果。
有下列情況者,對血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:
1.養(yǎng)干細胞時,干細胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。
2.養(yǎng)免疫細胞時,過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細胞實驗,培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實驗結(jié)果“失之毫厘,謬以千里"。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)毒素(jinliang ≤1EU/ml),對實驗至關(guān)重要;
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細胞轉(zhuǎn)染,或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實驗順利的**步。
5.實驗室有些細胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。
為了盡量減少內(nèi)毒素對細胞培養(yǎng)的影響,建議使用經(jīng)過測試和認證的內(nèi)毒素水平較低的FBS。重要的是要注意,從胎牛血清中去除所有內(nèi)毒素并不太現(xiàn)實,但過高的內(nèi)毒素殘留水平,仍可能對細胞培養(yǎng)產(chǎn)生影響。因此,仔細監(jiān)測胎牛血清對細胞生長和活力的影響,并選擇一款內(nèi)毒素含量低的血清是很重要的。
締一生物的Ausbian進口胎牛血清,內(nèi)毒素含量低,≤3EU/ml,為細胞實驗保駕護航。