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「細胞質(zhì)控」助力高質(zhì)量細胞培養(yǎng)

更新時間:2022-11-18  |  點擊率:641

人有生老病死,細胞也是如此。在細胞體外培養(yǎng)過程中,細胞的活力和狀態(tài)是處于一種動態(tài)變化的狀態(tài)。

脫離機體保護的細胞,往往是很脆弱的,在體外環(huán)境中生長,培養(yǎng)條件的輕微改變,或許就會令細胞發(fā)生不可預(yù)估的變化。就比如,常見的原代細胞培養(yǎng)過程中,即使保持培養(yǎng)條件并未發(fā)生改變,但在傳代過程中,細胞質(zhì)量也經(jīng)常是呈下降趨勢的。

細胞質(zhì)量改變,勢必會影響實驗結(jié)果。因此,對細胞質(zhì)量進行適當?shù)谋O(jiān)控,有助于掌握細胞狀態(tài),對其能否進行后續(xù)實驗做出合理的預(yù)判。

細胞質(zhì)控

傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng),主要是通過在顯微鏡下,觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化,以及傳代培養(yǎng)周期的變化,來判斷細胞狀態(tài)。這種判斷方法雖然便捷,但是由于比較主觀,誤差較大,也無法量化,或是進行統(tǒng)計學(xué)分析。

體外細胞的有效培養(yǎng)新概念——“細胞質(zhì)控"。

可以通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷等五方面對細胞生長生存狀態(tài)進行全面的監(jiān)控。

在體外細胞培養(yǎng)的過程中,細胞總有一些因各種原因而死亡,總細胞中活細胞所占的百分比,即是我們常說的細胞活力。

是“細胞質(zhì)控"中比較基礎(chǔ)的指標。常見的流式細胞設(shè)備及部分細胞計數(shù)儀器都可以對細胞進行計數(shù),也可以提供準確客觀的細胞活力數(shù)據(jù),為“細胞質(zhì)控"提供準確、客觀的統(tǒng)計學(xué)依據(jù)。

細胞活力檢測注意事項

檢測細胞活力時,需保證正常細胞的細胞膜是完整的。

核酸染料,如PI(Propidium iodide,碘化丙啶)常用于流式細胞儀分析。細胞在處于壞死或即將死亡的細胞細胞膜常處于受損狀態(tài),由于PI不能通過正常完整的細胞膜,因此,細胞活力不佳的細胞,PI可將其染成紅色,用于分辨壞死細胞/正常細胞。

如果染色時再加入另一種能夠通過細胞膜的核酸染料,就可以將活細胞和死細胞區(qū)分開。

例如,PI經(jīng)常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用,區(qū)別活力不同細胞。

細胞活力檢測的其他應(yīng)用

除了對細胞進行常規(guī)的質(zhì)量檢測,細胞活力測定還有其他更廣泛的應(yīng)用。

例如,細胞活力是細胞毒性實驗的指標之一。判斷某種外源成分(化合物、小分子藥物或蛋白質(zhì)等)對細胞是否存在毒性或毒性的高低,首先要觀察的,就是該成份是否會誘導(dǎo)細胞死亡,也就是細胞活力的變化。

另外,除了細胞毒性研究,細胞質(zhì)控在病毒感染或者RNA轉(zhuǎn)染的研究中發(fā)揮著重要作用。轉(zhuǎn)染/感染所用的試劑,或多或少會對細胞產(chǎn)生一定的負面影響。因此,在轉(zhuǎn)染之前,活細胞需要達到一定的比例才可以保證在轉(zhuǎn)染實驗的順利進行。

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  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

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