何為熱滅活?
經(jīng)常使用血清作為添加劑來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴,對(duì)熱滅活應(yīng)該都不陌生。
一般情況下,血清的滅活是指解凍后的血清,通過(guò)水浴加熱的方式,將其加熱至56℃維持30分鐘,或者40℃維持20分鐘,以達(dá)到滅活補(bǔ)體的目的。
補(bǔ)體是什么?
既然熱滅活的主要針對(duì)補(bǔ)體,那么我們就要搞清楚補(bǔ)體的是什么?有哪些基本的功能?
什么是補(bǔ)體?
補(bǔ)體是廣泛存在于人和脊椎動(dòng)物體血清及組織液中,不耐熱,活化后具有酶活性、可介導(dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的一類蛋白質(zhì)。
補(bǔ)體的基本功能
補(bǔ)體系統(tǒng)可通過(guò)3條既相對(duì)獨(dú)立又相互聯(lián)系的途徑被激活,從而發(fā)揮生理作用。
包括但不限于調(diào)理吞噬、裂解細(xì)胞、介導(dǎo)炎癥、免疫調(diào)節(jié)和清除免疫復(fù)合物等多種生物學(xué)效應(yīng),包括增強(qiáng)吞噬作用,增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的趨化性;增加血管的通透性;中和病毒;細(xì)胞溶解作用;免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用;刺激平滑肌收縮、細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
血清是否均需要熱滅活?
血清的最佳工作溫度一般是在37℃左右,所以熱滅火對(duì)于血清而言,也是一種不小的傷害,會(huì)導(dǎo)致一些營(yíng)養(yǎng)成分流失,進(jìn)而影響細(xì)胞狀態(tài)。
但如果所用血清中含有補(bǔ)體,且所培養(yǎng)的細(xì)胞、所涉及的實(shí)驗(yàn)對(duì)補(bǔ)體相關(guān)的蛋白較為敏感,建議進(jìn)行熱滅活處理。
胎牛血清
正規(guī)的胎牛血清,要求對(duì)5-8月胎齡(一般牛在10個(gè)月左右足月,后自然分娩)的胎牛采用心臟穿刺的方法采血,隨后進(jìn)行其他制備步驟,得到胎牛血清。
因此:
靠譜的胎牛血清,沒(méi)有形成一個(gè)完整的補(bǔ)體系統(tǒng),不會(huì)真正地干預(yù)免疫!
非胎牛血清
新生牛血清、小牛血清、成牛血清、馬血清、豬血清這類動(dòng)物血清,一般采集自補(bǔ)體系統(tǒng)發(fā)育*的供體,因此,如果涉及以下幾個(gè)方向(包括但不限于)建議合理熱滅活。
1、免疫學(xué)研究
2、誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化
3、利用昆蟲(chóng)細(xì)胞研究病毒感染
4、培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞
5、其他補(bǔ)體參與的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程