在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,因而細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。當(dāng)細(xì)胞(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染后,細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變,而細(xì)胞的生長(zhǎng)率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。
細(xì)胞株若受到細(xì)菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時(shí),會(huì)嚴(yán)重的影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。而細(xì)菌、真菌等之微生物污染時(shí),較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺(jué)。但是若受到支原體之污染時(shí),細(xì)胞之外觀較無(wú)明顯變化,但是其污染會(huì)造成細(xì)胞之生長(zhǎng)速率緩慢、細(xì)胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化。
1、支原體size 0.1~0.8 um,無(wú)細(xì)胞壁,可透過(guò)一般過(guò)濾膜(0.22-0.45 um)
2、支原體污染時(shí),沒(méi)有明顯的肉眼或一般光學(xué)顯微鏡可觀察到的特征變化
3、過(guò)去缺乏簡(jiǎn)單、快速且可靠的檢測(cè)方式
4、細(xì)胞流通間缺乏品管,造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染
5、研究或操作人員忽略污染問(wèn)題
對(duì)于低流行地區(qū),PCR檢測(cè)人員經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn)上崗后,核酸污染的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較小,但在疫區(qū)超負(fù)荷工作時(shí),就可能會(huì)遇到核酸污染的問(wèn)題,可通過(guò)以下措施降低污染機(jī)會(huì):
1.正確佩戴手套:手套未緊密貼合拇指、食指和中指,在進(jìn)行開(kāi)蓋操作時(shí)容易發(fā)生交叉污染。
2.正確使用生物安全柜:簡(jiǎn)單、整潔、避免通風(fēng)口堵塞;操作前后紫外線照射,消毒劑隨手可及;廢液缸里有1/3體積的含氯消毒液,并且及時(shí)清理廢液缸,保證廢物不超過(guò)廢液缸體積的2/3。
3.核酸提取儀去污染:每天多批次檢測(cè)時(shí),在每一批次檢測(cè)完以后必須用75%的乙醇和核酸去除劑對(duì)儀器進(jìn)行去污染。
4.重視通風(fēng):不定期對(duì)房間進(jìn)行通風(fēng),每次至少持續(xù)30min。
5.PCR擴(kuò)增區(qū)去污染:PCR反應(yīng)管必須蓋緊,避免擴(kuò)增后的核酸對(duì)環(huán)境的污染。
6.實(shí)驗(yàn)室隨手可及的消毒劑。
有沒(méi)有什么方法能夠簡(jiǎn)單高效地祛除DNA污染呢?
當(dāng)然有:Minerva Biolabs PCR Clean™
通過(guò)中和以及降解的原理,可快速有效地祛除任何物體表面的DNA、RNA以及DNA酶、RNA酶的污染,使它們快速的降解,從而確保PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。
使用方法也十分簡(jiǎn)單:
將PCR Clean™噴在操作臺(tái)表面,反應(yīng)1分鐘后,即可用干凈紙巾擦干試劑。
注:如果沒(méi)有擦拭干凈,液體揮發(fā)后表面可能有白色殘留,影響美觀。此時(shí)可用噴壺噴灑蒸餾水到白色殘留處,然后擦拭即可。
針對(duì)移液器需要去除DNA污染,可按照說(shuō)明書(shū)拆開(kāi)移液器,將桿軸浸泡在PCR Clean™噴霧劑中,1分鐘后取出后用水沖洗,晾干,重新組合。
PCR Clean™的優(yōu)點(diǎn):
1、快速:1分鐘起效。
2、方便:噴霧劑可直接使用。
3、保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員,避免接觸DNA污染。
4、穩(wěn)定性強(qiáng):PCR Clean™耐熱,可在室溫保存至少一年。低溫可能會(huì)形成沉淀,但在37℃迅速溶解。即使在65°C條件下存放兩周,也不會(huì)影響噴霧劑的祛除效果。
5、成分安全:PCR Clean™含有少量的磷酸和乙氧基醇,成分非堿性,無(wú)致癌性。