1.配制培養(yǎng)基:稱(chēng)取基礎(chǔ)培養(yǎng)基14.2g加入180mL蒸餾水,加熱溶解并不停攪拌;另取1.2g李斯特氏菌添加劑,加入20mL無(wú)菌水,并加入一些玻璃球,不停振動(dòng)1-2min,使其混合均勻,將二者分別于121℃高壓滅菌15min。冷至50℃左右時(shí),把李斯特氏菌添加劑加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,并加入復(fù)溶后的李斯特氏菌抑菌劑1支,混勻,傾入無(wú)菌平皿。使培養(yǎng)基的厚度約為2-3mm,這樣有利觀察不透明環(huán)。
使用前,把制備好的培養(yǎng)基放置室溫10-20分鐘。
2.按SN標(biāo)準(zhǔn)、GB標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)、ISO標(biāo)準(zhǔn)或其它標(biāo)準(zhǔn)制備樣品液;
3.把樣品液加入李氏增菌肉湯(LB1、LB2)中增菌;或把樣品液和Half-Fraser增菌液按照1:10的比例混勻,30℃培養(yǎng)24小時(shí);或其它增菌液中增菌培養(yǎng);
4.取一環(huán)增菌液劃線接種到李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上,36℃±1℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。
李斯特菌顯色培養(yǎng)基注意事項(xiàng):
1.貯存:制備好的固體平板保存于2-8℃,應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處,保存溫度2-8℃。
2.失效:干燥培養(yǎng)基超過(guò)保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。
3.嚴(yán)格按照標(biāo)簽說(shuō)明進(jìn)行配制培養(yǎng)基,避免混合時(shí)培養(yǎng)基和添加劑溫度過(guò)高導(dǎo)致平板出現(xiàn)絮狀物。